在酸性條件下，細胞內酸性磷酸酶可使萘酚AS-BI磷酸鹽水解，釋放出磷酸與萘酚，萘酚與重氮鹽偶聯生成不溶性有色產物，定位于細胞質中。
酸性磷酸酶（ACP）陽性顆粒為紅色。
1.巨噬細胞、部分網狀細胞呈較強陽性反應；
2.單核細胞、T淋巴細胞、漿細胞呈中等強度陽性；
3.粒細胞、巨核細胞、血小板為陰性或弱陽性；
4.紅細胞系統、B淋巴細胞呈陰性反應；
5.大多數組織中的細胞含有酸性磷酸酶，尤其前列腺細胞中此酶活性最強；
6.毛細胞白血病的毛細胞ACP染色多呈強陽性或中度陽性，且不被L-酒石酸抑制，其他細胞酒石酸抑制后均為陰性或極弱的陽性。
